基因組范圍的CRISPR敲除(GeCKO)文庫

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11年双色球基本走势图:基因組范圍的CRISPR敲除(GeCKO)文庫

双色球基本走势图表图中彩网 www.eqapgw.com.cn 基因組范圍的CRISPR 敲除(GeCKO)文庫能夠在人或小鼠細胞中快速產生功能缺失的突變體并且篩選所期望的表型。我們將提供Broad研究所張峰實驗室的全部GeCKO(8個)CRISPR文庫*。 GeCKO文庫是gRNA的混合文庫,可以在人或小鼠的基因組內敲除任何表達基因及非表達的基因,如miRNA基因。改進后的GeCKO v2.0文庫含有非靶向gRNA作為對照,與此同時用來轉導的慢病毒載體也同步進行了升級,以便更高效的富集病毒和提升病毒在原代細胞的轉染效率。GeCKO文庫已經被廣泛使用于原代的人或小鼠細胞,干細胞,癌細胞及各種穩定細胞系。 GeCKO文庫允許客戶在不同的條件下鑒定任何細胞功能必須的基因,篩選哪個基因的缺失使癌細胞具有耐藥性。要獲取更多GeCKO文庫設計、構建信息,請參考張峰實驗室發表的文獻:Sanjana N.E., Shalem O., Zhang F. Improved vectors and genome-wide libraries for CRISPR screening. Nat Methods. 2014 Aug;11(8):783-4. doi: 10.1038/nmeth.3047.

文庫內容

文庫名稱

Human Library A

Human Library B

Mouse Library A

Mouse Library B

描述65,383 sequences:
  • 19,050個基因,每3條sgRNA靶向1個基因;

  • 1,864個miRNA,每4條sgRNA靶向1個miRNA;

  • 1000條對照(非靶向性)sgRNAs

58,028 sequences:
  • 19,050個基因,每3條sgRNA靶向1個基因;

  • 1000條對照(非靶向性)sgRNAs

67,405 sequences:
  • 20,611個基因,每3條sgRNA靶向1個基因;

  • 1,175個miRNA,每4條sgRNA靶向1個miRNA;

  • 1000條對照(非靶向性)sgRNAs

62,804 sequences:
  • 20,611個基因,每3條sgRNA靶向1個基因;

  • 1000條對照(非靶向性)sgRNAs

GeCKO文庫選擇

文庫名稱

載體

交付量

周期*

Human GeCKO Library A

pLentiCRISPR v2
(all-in-one vector)

25 μg

5-7

100 μg

5-7

200 μg

5-7

Human GeCKO Library A


pLentiGuide-Puro
Accompanied by:
pLentiCas9-Blast


25 μg

5-7

100 μg

5-7

200 μg

5-7

Human GeCKO Library B

pLentiCRISPR v2
(all-in-one vector)

25 μg

5-7

100 μg

5-7

200 μg

5-7

Human GeCKO Library B


pLentiGuide-Puro
Accompanied by:
pLentiCas9-Blast


25 μg

5-7

100 μg

5-7

200 μg

5-7

Mouse GeCKO Library A

pLentiCRISPR v2
(all-in-one vector)

25 μg

5-7

100 μg

5-7

200 μg

5-7

Mouse GeCKO Library A


pLentiGuide-Puro
Accompanied by:
pLentiCas9-Blast


100 -900 μg**

8-10 weeks

*周期為工作日;**需求量可以100 μg為單位向上增加;歡迎咨詢,發送郵件中請備注說明文庫名稱及相應的Cat.No.

交付結果

  • 文庫(轉染級)以25 μg為一個單位量。100 μg 及200 μg文庫分別是以4 x 25 μg或者8 x 25 μg形式交付。 隨文庫發貨附帶技術指導,MSDS及COA 文件。

  • Mouse GeCKO Library A (dual vector): 100 μg混合文庫 (研究級)

    • 需求量可以100 μg為單位向上增加,可擴大到900 μg(轉染級)

    • 提供項目報告,包括小量測試(Step 1)所做Sanger測序的ABI文件及二代測序驗證(Step 4)的統計摘要;如您需要,還可提供完整可用的NGS原始數據。

GeCKO v2.0文庫載體選擇

為了交付在慢病毒載體上對細胞高效的GeCKO文庫,使用雙載體系統可以獲得較大的病毒滴度;在這個雙載體系統中,S.pyogenesCas9(lentiCas9-Blast)和sgRNA(lentiGuide-Puro)分別使用了帶有不同抗性篩選標記的單個病毒載體。同時,也可以使用all-in-one的lentiCRISPR v2載體,其具有比原來的lentiCRISPR載體高10倍的病毒滴度。

我們可提供如下有效使用的慢病毒載體以用于GeCKO文庫篩?。?/p>

    lentiCRISPRv2 single vector lentiviral GeCKO systemlentiCas9-Blast + lentiGuide-Puro two-vector lentiviral GeCKO system

GeCKO載體匯總

載體名稱gRNA 啟動子All-in-one vector?選擇/篩選標記載體圖譜

pLentiCRISPR v2

U6

是,EFS啟動子啟動Cas9表達,C端帶DYK

AmpR, PuroR

pLentiCRISPR v2
vector map

pLentiGuide-Puro

U6

否,pLentiCas9-Blast載體免費提供,以用于共表達

AmpR, PuroR

pLentiGuide-Puro
vector map

如何使用GeCKO文庫

GeCKO文庫是CRISPR gRNA的混合文庫,可以在人或小鼠的基因組內敲除任何基因及非表達的基因,如miRNA基因。每條gRNA克隆到優化過的慢病毒載體中以實現高效率地轉染原代細胞或培養細胞。GeCKO文庫應以較低的MOI值轉導細胞,以保證每個細胞進入不超過1條gRNA。轉染完成后在進行文庫篩選之前,應對細胞進行NGS深度測序,以評估gRNA在細胞中的表現。文庫篩選后,還需進行第二輪NGS測序并數據分析,以鑒定在篩選過程中缺失或富集的gRNA。通過GeCKO文庫篩選找到真正的陽性克隆,您需鑒定哪些基因相對應的gRNA是被富集的。要獲取關于GeCKO文庫篩選更多流程,請參考Genome Engineering網站。

GeCKO v2.0文庫特點

針對人類或小鼠基因組的每個基因,GeCKO文庫的設計包含:6條單鏈gRNA(sgRNA)以及針對每個miRNA的4條sgRNA,及1000條非靶向性的對照sgRNAs。

這些gRNA分布在每個基因超過3-4個組成型表達的外顯子上,以此將脫靶效應降至盡可能低。每個文庫均包括兩個子文庫A和B.每個子文庫都分別包含針對每個基因的3個唯一的sgRNA;僅A文庫包含可靶向1,864 個miRNAs中任意一個miRNA的4條sgRNA。A和B子文庫都包含了1000個非靶向性的對照sgRNA.使用單個子文庫能夠覆蓋基因組范圍,但也減少了完成一次篩選所需要的細胞數量。當實驗的細胞數量有限時(例如,原代細胞或體內篩?。?,這是非常有用的;當然,如需更大的篩選可以通過結合兩個子庫來完成。


CAS9基因編輯

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