抑制性消減雜交(SSH)文庫構建

眾所周知,生物體各種生命活動形式都和基因的時空表達差異相關,通過比較同種組織、臟器在不同生理狀態下或在不同生長發育階段的基因表達差異,可為解析生命活動過程提供重要信息。目前已經有很多分子生物學技術可用于研究基因表達差異,其中Diatchenko L等1996年建立的抑制性消減雜交法( Suppression Subtractive hybridization, SSH)以其假陽性率低、靈敏度高、低背景、重復性強和檢測范圍廣等優點迅速得到廣泛應用,已成功用于不同細胞株、不同器官組織、個體不同發育階段以及機體在外界因子作用下差異表達基因,研究對象涉及細菌、病毒、細胞、動物、植物和人類等。國內近幾年來應用SSH技術開展的研究也非?;鈐?,涉及領域相當廣泛。


  • 產品詳情

抑制性消減雜交(SSH)文庫構建

一、技術介紹

眾所周知,生物體各種生命活動形式都和基因的時空表達差異相關,通過比較同種組織、臟器在不同生理狀態下或在不同生長發育階段的基因表達差異,可為解析生命活動過程提供重要信息。目前已經有很多分子生物學技術可用于研究基因表達差異,其中Diatchenko L1996年建立的抑制性消減雜交法( Suppression Subtractive hybridization, SSH)以其假陽性率低、靈敏度高、低背景、重復性強和檢測范圍廣等優點迅速得到廣泛應用,已成功用于不同細胞株、不同器官組織、個體不同發育階段以及機體在外界因子作用下差異表達基因,研究對象涉及細菌、病毒、細胞、動物、植物和人類等。國內近幾年來應用SSH技術開展的研究也非?;鈐?,涉及領域相當廣泛。

 

  SSH技術基本原理:SSH技術利用抑制性PCR能選擇性擴增不同豐度差異基因和cDNA 消減雜交特點,運用雜交二級動力學原理(即高豐度序列退火時產生同源雜交的速度大于低豐度序列),使原本不同豐度的DNA序列相對含量趨于一致。然后利用抑制性PCR特點,兩端接上同一接頭的非目的基因片段由于具有反向重復序列,在退火時容易形成發夾互補結構,PCR中不能作為模板與引物配對擴增,從而選擇性擴增目的基因而抑制非目的基因片段擴增。消減雜交扣除了實驗組和對照組之間同源序列,再結合抑制性PCR的動力學富集,實現高效分離低豐度特異性非同源片段。如下圖:

 

二、技術用途

我們可以利用這種有效的技術來比較兩個mRNA群體,并獲得只在一個群體中過量表達或特異性表達的基因的cDNA。

我公司采用Clontech公司 PCR-SelectTM cDNA Subtraction Kit構建差減文庫,操作精準、經驗豐富,已完成上百個SSH文庫的構建(包括植物組織、動物組織、臨床樣本、微生物等各種樣本)


三、交付結果

我們的SSH消減文庫,交付的產品如下:

 

產品名稱

交付保準

包裝形式

儲存條件

消減產物

(正、反向消減文庫)

100ul

 

1.5ml螺旋管

-80

消減文庫PCR產物

(正、反向消減文庫)

大于20ul

1.5ml螺旋管

-80

消減文庫甘油菌

(正、反向消減文庫)

1.5ml

平均插入片段>300bp

1.5ml螺旋管

-80

文庫構建圖片

電子版

JPG格式

常溫

文庫構建報告

電子版

PDF格式

常溫

四、服務時間

25個工作日內。

五、材料要求

客戶構建指定的酵母雙雜交cDNA文庫,由客戶提供組織、細胞或總RNA給我們即可:
 細胞樣本:細胞數量大于1*10^7 
 動物樣本:大于1g 
 植物樣本:大于2g 
 RNA:大于200ug 
  
六、客戶案例

目前我們已經成功完成2000多個的文庫構建,主要客戶為中國科學院上海植物生理生態研究所、上海交通大學、浙江大學、浙江省農科院、山東省農科院等多家單位完成酵母雙(單)雜交文庫構建服務,物種包括人、小鼠、大鼠、水稻、擬南芥、牡丹、稻飛虱、蘋果、油菜、小麥、貝殼、葡萄、真菌等。

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