?Crispr/Cas9 基因編輯腺病毒包裝

Crispr/Cas9 腺病毒包裝服務

 

 

      Crispr/Cas9 簡介

CRISPR (clustered, regularly interspaced, short palindromic repeats)是一種來自細菌降解入侵的病毒 DNA 或其他外源 DNA 的免疫機制。目前,來自Streptococcus pyogenes 的CRISPR-Cas9系統應用廣泛。Cas9 蛋白(含有兩個核酸酶結構域,可以分別切割DNA 兩條單鏈。Cas9首先與crRNA及tracrRNA結合成復合物,然后通過PAM序列結合并侵入DNA,形成RNA-DNA復合結構,進而對目的DNA雙鏈進行切割,使DNA雙鏈斷裂。

CRISPR-Cas9系統已經成功應用于植物、細菌、酵母、魚類及哺乳動物細胞,是目前高效的基因組編輯系統。

通過基因工程手段對crRNA和tracrRNA進行改造,將其連接在一起得到sgRNA(single guide RNA)。融合的RNA具有與野生型RNA類似的活力,但因為結構得到了簡化更方便研究者使用。通過將表達sgRNA的原件與表達Cas9的原件相連接,得到可以同時表達兩者的質粒,將其轉染細胞,便能夠對目的基因進行操作。

??粕锎蔥灤緣氖狀謂玞as9和gRNA整合到腺病毒載體中,成功包裝cas9腺病毒和gRNA腺病毒,很大程度上彌補了crispr/cas9質粒感染效率低,從而導致敲除效率低的缺陷。

??粕锿瞥齙腃as9/gRNA腺病毒利用cas9和gRNA結合特異性,同時借助腺病毒高感染效率,高表達效率,提高crispr/cas9基因敲除效率,縮短基因敲除周期,使得基因敲除周期短,成本低,更易于操作。


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Crispr/Cas9 腺病毒包裝服務

 

 

      Crispr/Cas9 簡介

CRISPR (clustered, regularly interspaced, short palindromic repeats)是一種來自細菌降解入侵的病毒 DNA 或其他外源 DNA 的免疫機制。目前,來自Streptococcus pyogenes 的CRISPR-Cas9系統應用廣泛。Cas9 蛋白(含有兩個核酸酶結構域,可以分別切割DNA 兩條單鏈。Cas9首先與crRNA及tracrRNA結合成復合物,然后通過PAM序列結合并侵入DNA,形成RNA-DNA復合結構,進而對目的DNA雙鏈進行切割,使DNA雙鏈斷裂。

CRISPR-Cas9系統已經成功應用于植物、細菌、酵母、魚類及哺乳動物細胞,是目前高效的基因組編輯系統。

通過基因工程手段對crRNA和tracrRNA進行改造,將其連接在一起得到sgRNA(single guide RNA)。融合的RNA具有與野生型RNA類似的活力,但因為結構得到了簡化更方便研究者使用。通過將表達sgRNA的原件與表達Cas9的原件相連接,得到可以同時表達兩者的質粒,將其轉染細胞,便能夠對目的基因進行操作。

??粕锎蔥灤緣氖狀謂玞as9和gRNA整合到腺病毒載體中,成功包裝cas9腺病毒和gRNA腺病毒,很大程度上彌補了crispr/cas9質粒感染效率低,從而導致敲除效率低的缺陷。

??粕锿瞥齙腃as9/gRNA腺病毒利用cas9和gRNA結合特異性,同時借助腺病毒高感染效率,高表達效率,提高crispr/cas9基因敲除效率,縮短基因敲除周期,使得基因敲除周期短,成本低,更易于操作。

Crispr/Cas9腺病毒特點:
   

1、可感染多種分裂期和非分裂期細胞,感染效率高、敲除效率高;

2、操作簡單,容易掌握;

3、基因敲除周期短,成本低;

4、適合哺乳動物不同種屬不同基因的操作,適用范圍廣。

 

服務流程

 

 

 

參考文獻

   1、Laterodorsal tegmentum interneuron subtypes oppositely regulate olfactory cue-induced innate fear;

     (2016年發表于Nature Neuroscience,作者:段樹民)

   2、Endoplasmic reticulum stress induced by tunicamycin and thapsigargin protects against transient ischemic brain injury Involvement of PARK2-dependent mitophagy;

     (2016年發表于Autophagy作者:Xiangnan Zhang

   3、SNX13 reduction mediates heart failure through degradative sorting of apoptosis repressor with caspase recruitment domain;

     (2016年發表于Nature Communications,作者:陳義漢)

   4、TRB3 links insulin IGF to tumour promotion by interacting with p62 and impeding autophagic proteasomal degradations;

     (2016年發表于Nature Communications,作者:胡卓偉)

   5、Suppression of KRas-mutant cancer through the combined inhibition of KRAS with PLK1 and ROCK;

     (2016年發表于Nature Communications,作者:劉明耀)

   6、POH1 deubiquitylates and stabilizes E2F1 to promote tumour formation;

     (2015年發表于Nature Communications,作者:Yongzhong Liu)


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