Crispr/Cas9 基因編輯慢病毒包裝

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  • 產品詳情

服務簡介

 

 

       Cas9蛋白的CDS長達4kb,克隆難度和包毒難度都相對大,將Cas9基因高效導入細胞是應用Cas9/CRISPR系統進行基因敲除的難點之一,極大地限制可供選擇的將基因導入細胞的方法。并且在用CRISPR/Cas9系統進行基因敲除時,還需要同時轉入識別靶點的gRNA,篩選陽性細胞的抗性基因或熒光基因,用同源重組法進行基因敲除,還需要導入同源重組模板。如此多的基因共同表達,很難得到較高的基因編輯效率,造成后續的陽性克隆篩選和檢測工作難度大。

 

       ??粕镅蟹⒊雎《綜as9表達體系,該體系采用慢病毒體系先在細胞中穩定表達Cas9蛋白,構建穩定表達Cas9蛋白的細胞系,再在該細胞系的基礎上導入gRNA和基因敲除實驗中用到的其它原件用于特異性基因敲除。

 

 

產品優勢

 

 

a、實驗方案設計更靈活。由于不必表達大蛋白Cas9,可以根據細胞特性選擇化學轉染、腺病毒、腺相關病毒等多種方法導入或敲除相關基因;

 

b、提高基因敲除效率。在穩定表達Cas9蛋白的細胞系上進行基因敲除比瞬時轉染Cas9進行基因敲除的效率更高;

 

c、可對同一細胞進行多個基因敲除實驗。對于需要在同一個細胞系中進行多個基因的編輯或需要長期用一個細胞模型進行多項基因研究,先構建一個Cas9蛋白穩定表達的細胞系可顯著提高后續實驗的效率,降低實驗難度。

 

 

 

服務特點

 

 

a、適用于在同一個細胞系中需要進行多個基因敲除的實驗;

b、基因敲除效率比直接質粒轉染更高;

c、提供多種不同熒光和抗性標記的慢病毒表達載體,更易篩選到基因敲除成功細胞;

d、接受cas9蛋白穩定表達不同細胞系定制。

 

 

服務流程

 

 

 

 

A、cas9載體構建及慢病毒包裝

     將cas9基因CDS區克隆至慢病毒載體,并進行cas9慢病毒包裝。

 

B、穩定株篩選

     將cas9慢病毒感染特定的目的細胞,進行cas9穩定表達的細胞株篩選。

 

 

參考文獻

   1、MicroRNA-30 family members regulate calcium/calcineurin signaling in podocytes;

     (2016年發表于JCI,作者:劉志紅)

   2、TGF-β1 promotes osteosarcoma cell migration and invasion through the miR-143-versican pathway;

     (2014年發表于Cellular Physiology and Biochemistry,作者:Shaohua Li and Tao Cheng

   3、miR-451a Inhibited Cell Proliferation and Enhanced Tamoxifen Sensitive in Breast Cancer via Macrophage Migration Inhibitory Factor;

     (2015年發表于BioMed Research International,作者:李紅)

   4、Smad4 mediated BMP2 signal is essential for the regulation of GATA4 and Nkx2. 5 by affecting the histone H3 acetylation in H9c2 cells;

     (2014年發表于Biochemical and Biophysical Research Communications,作者:田杰)

   5、Effects and mechanism of downregulation of COX?2 expression by RNA interference on proliferation and apoptosis of human breast cancer MCF?7 cells;

     (2014年發表于Molecular Medicine Reports,作者:hui Han)

   6、MicroRNA-486-5p targeting PIM-1 suppresses cell proliferation in breast cancer cells;

     (2014年發表于Tumor Biology,作者:Zhenlin Yang)


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